Front Oncol：神经母细胞瘤"冷肿瘤"破局新靶点——LGALS3BP通过胞外囊泡"重编程"骨髓基质细胞

神经母细胞瘤（neuroblastoma, NB）是儿童最常见的颅外实体瘤，占儿童肿瘤相关死亡的显著比例。高危NB的标志性特征是高度侵袭性转移和免疫抑制性、"冷"肿瘤微环境（TME），直接导致免疫治疗响应率有限。细胞外囊泡（extracellular vesicles, EVs）作为肿瘤-基质间通讯的关键介质，可通过递送致癌蛋白和miRNA重塑周围基质细胞行为。

LGALS3BP（Galectin-3结合蛋白，又称Gal-3BP或90K）是一种分子量约90 kDa的多功能糖蛋白，在多种恶性肿瘤中高表达。本团队前期工作证实，LGALS3BP在NB患者来源的EVs表面显著富集，且循环EV相关LGALS3BP水平与转移呈正相关；靶向LGALS3BP的抗体药物偶联物（ADC）1959-ss/DM4可增强瘤内T细胞浸润，并与抗PD-1治疗协同。此外，NB来源EVs还可诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）分泌促炎因子IL-6。本研究旨在系统解析分泌型LGALS3BP如何通过改变EV货物组成，调控BMSCs分泌谱，进而影响NB肿瘤微环境中的肿瘤-基质对话。

本研究采用患者来源的原代NB细胞系hNB（天然低表达LGALS3BP）及其经慢病毒过表达LGALS3BP的亚系hNB LGALS3BP，并以经典NB细胞系SK-N-AS为对照。通过差速超速离心法从条件培养基（CM）中分离EVs，采用纳米颗粒追踪分析（NTA）、Western blot（TSG101、CD9、Calnexin标志）和PKH67免疫荧光对EVs进行表征。

将BMSCs分别与hNB CTRL或hNB LGALS3BP的条件培养基共培养，并设置±抗LGALS3BP单抗1959阻断组。采用32重Luminex panel定量细胞因子/趋化因子分泌谱；通过TaqMan miRNA芯片及茎环RT-qPCR筛选并验证EV中差异富集的miRNA；采用LC-MS/MS无标记蛋白质组学系统比较细胞裂解物与EVs的蛋白组成；并结合GEPIA2和R2基因组平台的公开NB临床队列进行生存相关性分析。

hNB LGALS3BP细胞分泌高水平糖基化LGALS3BP（成熟形式约100 kDa），且该蛋白显著富集于EVs；而hNB CTRL细胞几乎不分泌可检测的LGALS3BP。NTA显示两组EV的粒径分布和浓度无显著差异，提示LGALS3BP改变的是货物组成而非EV产量。

功能实验显示，LGALS3BP条件培养基可诱导BMSCs分泌谱发生显著重塑：IL-6、IL-8、IL-1β、IL-10、TNFα、VEGF-A、IFNγ、CXCL10等炎症因子和血管生成因子显著升高；ELISA进一步证实VEGF和IL-6在hNB LGALS3BP组显著升高。加入抗LGALS3BP单抗1959后，BMSCs中检测到的~100 kDa LGALS3BP信号明显减弱，证实该效应由LGALS3BP特异性介导。

miRNA谱分析显示，在94个可检测miRNA中，33个在LGALS3BP-EVs与CTRL-EVs间差异表达；7个miRNA（包括miR-27b-3p、miR-340-5p、miR-103a-3p、miR-152-3p）在LGALS3BP-EVs中显著富集。PKH67标记共聚焦成像证实EVs可被BMSCs摄取，且上述miRNA在受体BMSCs中相应升高。

蛋白质组学揭示EVs中显著富集RNA结合蛋白，特别是丝氨酸/精氨酸富集剪接因子（SRSF）家族，其中致癌剪接因子SRSF1经Western blot验证在LGALS3BP-EVs中特异性升高。临床队列分析显示，高SRSF1表达与NB患者较差的总生存期显著相关（Kocak队列，p=4.74×10⁻¹¹）。

蛋白质组学及验证表明，LGALS3BP 阳性的神经母细胞瘤胞外囊泡富集 SRSF1 等 SRSF 家族 RNA 结合蛋白，且肿瘤组织高 SRSF1 与神经母细胞瘤高危分型及患者不良生存预后相关。

本研究首次系统证实，LGALS3BP与NB-EV货物组成的选择性重塑密切相关：LGALS3BP阳性EV通过富集特定miRNA和RNA结合蛋白（尤其SRSF1），诱导BMSCs向促肿瘤、促血管生成的分泌表型转化，从而促进肿瘤-基质对话。SRSF1可能作为EV miRNA分拣的关键调控因子参与其中。上述发现拓展了对NB肿瘤微环境调控机制的认识，为LGALS3BP作为NB生物标志物和治疗靶点提供了新的实验依据，也为联合靶向LGALS3BP与EV货物通路的干预策略奠定了基础。